实验室小白篇:细胞培养用品及其准备

2024年11月28日 阅读量:58


一、细胞培养瓶、培养皿和培养板

目前,细胞培养很少使用传统的玻璃产品,如玻璃卡培养瓶、玻璃离心管、玻璃试剂瓶,大多使用一次性塑料培养瓶、塑料离心管、塑料移动管等,这些项目的规格也更丰富,如培养瓶T25、T75 、T150、T175 (阿拉伯数字表示培养面积),培养袋和普通培养板(孔径不同,如 6 孔、12 孔、24 孔、48 孔、96 孔等)、培养皿(直径不同,如60mm、100mm、150mm) 大面积多层培养板 。多孔板的使用方便了高通量筛选,节省了细胞用量。多孔板的使用方便了高通量筛选,节省了细胞的用量。大面积培养可用于生物工程产品的研发、制备和生产。在生物工程产品研发、制备、生产等应用的驱使下,还有转瓶、中空纤维细胞培养装置、悬浮细胞或贴壁细胞培养细胞发酵罐(5L) 、10L、30L 、50L 等),可用于大规模细胞培养。

二、移液管和吸管

对于移液管和吸管,可以选择玻璃或塑料,但操作时需要准备不同的规格(如1ml) 、5ml、10ml 等)。一般安装在玻璃或不锈钢筒内消毒。国外有一次性塑料吸管,规格与玻璃吸管相同。此外,还有电动移液器,操作方便,省力。为方便使用多孔培养板,快速准确地微量加液,还有多孔加样枪 。在实际操作中,可根据具体的培养量和使用的培养容器选择合适的移液工具。

三、离心管

在细胞传代过程中,消化后的细胞悬液需要离心去除胰蛋白酶, 或者计数和调整细胞浓度。常用的离心管包括5ml 、15ml、50ml 规格的, 塑料制或玻璃制离心管均可, 也有厂家提供商品化20 一次性塑料离心管一次性消毒 。玻璃离心管应严格按照玻璃器皿的清洗消毒程序进行无菌处理。

四、其它用品

细胞培养还需要不同规格的细胞冻存管、青霉素瓶和Eppendorf 管等, 用于分装血清、抗生素等; 500ml、250ml、100ml、50m) 等规格的试剂瓶,经清洗消毒后, 用于培养液、血清和消化液的分装。此外,还需要准备喷壶、吸头、棉花和过滤器。 。

五、玻璃器皿的清洗消毒

(一)玻璃器皿的清洗

细胞培养及相关工作中常用的玻璃器皿包括各种规格的玻璃移液管、试剂瓶、平盘、量筒、烧杯等。虽然有自动清洗机,但仪器成本昂贵,需要配套的洗涤剂。如果实验室玻璃器皿的用量不是特别大,考虑经济因素, 一般选择人工清洗。

1. 玻璃器皿的清洁要求

  • 物理清洁:判断简单,去离子水不挂墙。
  • 化学清洁:无有机物、化学品残留。清洗洗衣粉、洗涤剂等, 要特别注意,尽量不要或少用。
  • 生物清洁:无热原。

2. 清洗步骤

  • 清水清洗, 烤干。
  • 稀酸用于新器皿( 1mol/LHCI ) 、稀碱( 1mol/L NaOH) 处理。
  • 用过的旧器皿,尤其是接触过有机物的器皿,需要强酸(硫酸)-重铭酸钾制备的洗液)浸泡时间可根据污染程度确定, 一般为2h 以上或过夜。
  • 捞出后,用清水冲洗25 次。
  • 冲洗去离子水10 次,或浸泡3 每次1~2h 。
  • 160~200 ℃ 干烤2~ 6h,或湿热高温高压消毒。

(二)玻璃器皿的消毒

将清洗过的玻璃器皿放入容器(铝饭盒)或用锡盒包裹,160℃ 干热灭菌1h , 或121℃ 高压高温灭菌20min 。

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