电转染实验中易出现的问题

1.        电场强度不合适
适当的电场强度对电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；不能过低，过低不能增加膜的渗透性或在膜上形成小孔。不同的细胞系统具有不同的最佳场强度，在实验前应确定转染细胞系统的最佳电场强度。
2.        错误的细胞选择
用于电转的细胞一般选择对数生长期的细胞(15代以内，代代后2d)。由于对数生长期细胞分裂旺盛，表面结构比稳定期细胞致密，电转后细胞膜恢复能力强，有丝分裂期细胞更容易接受外源DNA.
3.        质粒质量差
首先，DNA应该选择纯度高的质粒／RNA应该超纯(A260／A280>1．8)其次，不应含内毒 同时，质粒应溶于双蒸汽而不是TE缓冲溶液。另外，DNA浓度不宜过高。
4.        电转染试剂不合适
电击会对细胞造成一定程度的损伤。应注意转染试剂的选择。应选择具有细胞膜修复成分的电转染试剂，如engren的entranster-E，最大限度地减少电击对细胞的损伤。而且，Entranster-lonzaae适用于lonza、Bio-rad、各种电转仪，如BTX。