如何制备含血清的培养基？

体外哺乳动物的细胞培养的关键之一是在培养容器中创造生理环境和特殊细胞类型的特异性反应。液体培养基至少应为细胞提供生长所需的营养、能量和恒定的pH值 以及适当的渗透压。此外，培养的外部环境，特别是隔水CO₂培养箱必须达到稳定的温度和湿度，防止培养液蒸发，并提供呼吸所需的O₂ 在培养液中维持碳酸氢盐缓冲系统的CO₂ 。目前，常用的培养基一般由两部分组成：基本营养和补充成分。它们的组成可能有很大的不同。无论如何，完全培养基的这两种成分是细胞生存和增殖不可或缺的。

注意：所有用于细胞培养的溶液和培养液均采用反向渗透系统生产的纯水制备；培养器皿应用水冲洗，不得用消毒剂处理。

注意：所有接触活细胞的试剂和设备必须同时灭菌，并采用相应的无菌技术。

如何制备含血清的培养基？

许多细胞类型，特别是成纤维细胞和转化细胞，在基础培养基中增加5%~20%的生存和增殖 (v/v) 血清。值得注意的是，如果培养的组织标本中有多种细胞类型，纤维细胞具有生长优势。此外，培养基还可以有选择地对抗某些类型细胞的增殖。除了修复过的细胞外，添加血清成分的培养基并不真正接近细胞的生理环境。

材料

• DMEM基础营养培养基
• HEPES
• NaHCO₃
• 谷氨酰胺和丙酮酸
• 青霉素G 还有硫酸链霉素
• 5mol/L NaOH
• 血清
• 除菌滤器
• 0.2μm 微孔滤器

步骤

1. 用1.8~0.9 两倍体积的水溶性粉末培养基，不断搅拌。
   •若为商用液体培养基，直接加入青霉素、链霉素储存液，进入步骤8 。
   
   
2. 加入一定量的HEPES 在最终体积培养基中，溶液为15mmol//L 。
   
   
3. 根据制造商推荐剂量添加NaHCO₃（例如， 5 % CO₂ 压力下， NaHCO₃ 浓度为14~36mmol/L) 。
   
   
4. 加谷氨酰胺，最终浓度为0. 01% (w/ v) ；最终浓度为0的丙酮酸. 01% (w/v) 。
   
   
5. 添加青霉素G， 最终浓度为100IU/ ml; 硫酸链霉素的最终浓度为50μg/ml 。
   
   
6. 5mol/L NaOH 培养基pH的溶液调节 至7. 4, 补水至终体积(1) X ) 。如有必要，调整pH值 。
   
   
7. 用0. 2μm 微孔过滤器过滤培养基， 4°C 避光存放。
   
   
8. 按需添加血清。