细胞培养的质量是细胞相关实验的基石。很多朋友都经历过因为细胞污染影响实验进度的抑郁。被老板批评是小事，影响正常毕业是大事。如何区分细胞污染，是否是细胞污染？是什么样的细胞污染？细胞污染后如何处理？
预防污染
细胞培养是一项细致的工作，一不小心就会造成污染，最好养成良好的无菌操作习惯。个人经验是进入实验室前最好洗手，很多实验者都不是老板。这是中国研究人员的一个极端错误。我告诉你，仔细洗手比喷酒精好。最好仔细洗肥皂/肥皂，直到手腕和指甲缝。洗两次是个不错的选择。实验必须是白大褂，必须是长袖，袖口紧，如果不能，袖口窝在手臂上。一定要在裸露的手腕上喷酒精。戴上手套后，请避免接触工作台外，如果必须接触，再喷酒精。
细胞实验前，超净台/实验室紫外线辐射30min，细胞培养室最好有24h空气消毒装置。操作前70％酒精擦拭超净台消毒，酒精擦拭手，擦拭培养瓶，擦拭培养基瓶和各种瓶口，简而言之，最好用酒精擦拭所有进入超净台的物品。尽量把培养瓶和培养液托在下面，不要拿瓶颈部位。需要注意的是，超净台内的东西一定要尽量少放，太多的东西会影响超净台内的空气流通和空气消毒。尽量避免在实验过程中大惊小怪。
每天观察细胞状态，一旦发现细胞有问题（如生长缓慢），立即处理。一些刚接触细胞的朋友有时可能不确定情况，并渴望得到帮助。如何区分细胞污染，是否是细胞污染？是那种细胞污染吗？细胞污染后如何处理？
细胞污染鉴别方法
这里告诉你如何判断污染:如果是细菌污染，培基应该很快就会浑浊。如果是真菌感染，尤其是初期感染，在低倍镜下可以看到小黑点，尤其是小黑点，要特别注意。如果不确定，换高倍镜。如果是死细胞，可以在高倍镜下区分，而真菌高倍镜下仍然是小黑点。有些(如支原体)污染，镜检是看不见的，但细胞生长异常。因此，如果细胞生长异常，请将其扔掉。同时，由于支原体的空气传播，请检查您的培养液和培养箱是否被污染。白念珠菌是人类霉菌感染中常见的霉菌类型。虽然有时我们感觉不到，但它存在于你我身边，甚至存在于我身上。霉菌污染主要来自空气，所以在实验中聊天，或者瓶口打开时间太长，培养箱开关频繁是主要原因，我们应该找到更多自己的原因。培养箱水盘最好一周用酒精或0.2％新吉灭擦一次，如果有紫外线照射会更好
如何解决细胞污染？
如何解决细胞污染？当然，如果你的细胞仍然过剩或冷冻，我建议你扔掉污染，然后恢复方便和麻烦。不幸的是，如果没有，我们必须拯救细胞。普通双抗(链霉素和青霉素)可用于细菌污染(常见金黄色葡萄球菌和大肠杆菌)；如果是霉菌或真菌污染，加入两性霉素B进行清洗和培养，最终浓度一般为2.5μg/ml（在30μg/ml会有细胞毒性)。还可选择在培养基中加入3ug/ml制霉素或放线菌素D。如果支原体或黑胶虫被污染，因为太难处理，处理成本更大更麻烦，建议直接扔掉。以免造成实验室其他污染，得不偿失。
对于在墙上生长的细胞来说，相对简单但麻烦。下面我主要讨论贴壁生长的细胞。清洁区不是没有细菌，而是细菌数量很少。国家标准100级清洁标准是浮游菌数不得超过每立方米5个，沉降菌数不得超过每个培养皿1个。国外标准略高于中国标准，要求较少。 所以在我们的清洁操作台上，并不是真的没有细菌，所以在操作中或尽可能快速地完成操作。尽量减少进入培养系统的细菌数量。因此，处理细菌污染的重要原则是：无限稀释细菌浓度，无限减少细菌数量！
1） 将污染的培养液倒出，转热瓶口，加入10mlPBS，适当摇动清洗培养瓶，然后倒出。转热瓶口。
2） 继续加入10mlPBS，摇晃同样的方法，清洗培养瓶，然后倒出。
3） 继续加入5mlPBS，用同样的方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。
4） 重复步骤3，然后清洗。
5） 重复步骤3，然后清洗。
6） 加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
7） 加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
8） 加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。
9） 加入10ml培养液，加入2ml双抗，放入培养箱进行培养。5小时后，倒入培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，放入离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。在新的培养瓶中培养，在培养系统中加入2ml双抗。
10） 24小时后，根据情况更换液体。如果污染仍然严重，培养基浑浊，重复上述步骤。如果没有污染物，请继续步骤1）、3）、4）、6）、8)然后加入培养液培养，培养系统加入2ml双抗.
11） 24小时后，如果污染仍然严重，可以重复一次。如果污染只能丢弃（但通常没有），如果镜子下没有污染物，则更换液体PBS洗瓶，正常培养。
很多人误解进口血清贵，其实不然。GIBCO NCS，马血清比国内便宜得多，质量好得多。只有FBS非常昂贵。大多数情况下，国内血清往往是污染源，因此应严格监测国内血清的状态。
上述方法主要针对贴壁生长的细胞，在操作过程中，一定要小心操作动作，轻柔慢慢，避免大动作鲁莽。防止细胞脱落。如果上述方法操作得当，基本上可以拯救你的细胞。当然，如果你的细胞仍然过剩或冷冻，我建议你扔掉污染，然后恢复方便和麻烦。这种拯救细胞主要是针对你只剩下这瓶细胞无路可退的时候。欢迎讨论！
