对于不同的疾病，由于不同种族、不同民族的遗传基因不同， 特别是对复杂疾病的易感性、对各种药物的耐受性和对各种环境因素的反应也不同，建立了中国肿瘤细胞株， 肿瘤模型可以为中国疾病的诊断、预防和药物开发提供。
(一)材料和设备
1. 眼科切割无菌材料，眼科切割， 细胞培养瓶T25一次性培养皿 、T75 , 冷冻管，一次性小滤器， 一次性离心15~50ml， 高糖DMEM 培养液， 1% 1V型胶原酶，绿色／链霉素、胎牛血清、二甲基亚啶、冷冻液。
2. 超净操作柜的设备／台、CO2 培养箱、4 ℃ 冰箱、－70°C 冰箱、离心机、相差显缴镜及摄影设备。
(二)操作步骤
在无菌条件下，取肿瘤手术切除的肿瘤组织被放置在50毫升 离心管中含有双倍双抗试液D-Hanks溶液，并尽快运输到实验室，尽快进行以下操作。
1． 在超净操作台中，将肿瘤组织从离心管中移出10cm 在培养皿中，去除脂肪和出血，用D块使用肿瘤组织块-Hanks 清洗溶液(含双抗试液)，将组织移入另一个无菌培养皿中。
2. 用无菌剪刀将组织剪成2~3 mm3 大小，用D-Hanks 溶液清洗切割的组织块2 然后将组织块移入15ml 离心管中，350g 离心8min 之后，弃去上清液，加3毫升 IV型胶原酶混合， 37°C 水浴15min， 每5min 震荡1 次。
3. 酶液混浊时(显微镜下可见大量游离细胞) ，将清液轻轻吸入另一个无菌离心管，并加入含血清的高糖DMEM培养液终止反应。
4 . 在未消化的组织块中加入新鲜消化液，重复此步骤2~3 第二，直到大部分细胞被消化，消化好的细胞悬液混合均匀，350克 离心8min， 弃去上清液，用D-Hanks 溶液洗涤2 次。
5. 将细胞溶解在8毫升 高糖DMEM 在T25中接种完全培养液 在细胞培养瓶中。
6. 细胞培养在37°C 、5% CO2 培养箱中， 48h 换液后，抛弃未粘壁细胞。每2~3d 换液1 第二，细胞生长后传代培养。
7. 当细胞扩展到不同的代数时，一些细胞可以冻结。一方面，尽快保存一些细胞，以便于未来的比较、观察和识别，另一方面，可以做一些储备，以防止微生物污染或细胞交叉污染。
(3)细胞形态学鉴定
直径10厘米的细胞接种 从细胞汇合到培养皿中的盖玻片(放入5%) CO2 、95% 在湿度培养箱中培养)，并根据需要进行CK、HE 等染色。
(四)试剂的准备
1. 抗生素的制备 青霉素和链霉素， 一般配制浓度为10000U/000U/ml 和10000μg/ml，用无菌的D-Hanks 溶液或生理盐水溶解，分装小瓶， 5ml/瓶， －20℃ 冰箱保存备用。每100毫升使用一次。 全培养液加1ml双抗试液(每毫升培养液含100U/1000链霉素)μg ）。
2. 制备完整的培养液 高糖DMEM 培养液＋ 10％胎牛血清＋1％双抗试液。
3. 制备冷冻液 30％胎牛血清， 5％二甲基亚苁，分装， －储存20℃冰箱备用。使用时1ml 一管可以冷冻。
（五）小结
1. 做好详细的实验记录。
2. 注意无菌操作，防止细胞间交叉污染。
3. 细胞每传7~8 代冻存1 批，并清楚地记录代数。
4. 20 第二次之后，进行全面鉴定。
