(一)无菌操作
细胞在体外生长，其生活环境发生了很大的变化。首先，体外培养细胞缺乏抗感染能力，因此应进行无菌操作，以最大限度地防止微生物污染。所有用于培养的物品和液体都应无菌。最好在操作前列出所需的物品，培养液必须是37°C预热或室温平衡，所有物品准备好后开始操作， 避免往返取用品。
(二)细胞培养操作区消毒
使用前后无菌间或超净台的操作区域需要紫外灯照射20-30min 消毒。紫外线照射期间，不要将培养细胞和培养液放在桌子上。所有进入操作区域的物品需要75个％乙醇擦拭消毒。工作前后台面需要75％乙醇擦拭消霉， 特别是当液体溢出时，需要立即擦拭。
(三)洗手穿衣
原则上和手术一样。进入无菌室时，应更换专用无菌衣服、口罩和帽子。最好双手戴乳胶手套， 然后用75％用乙醇棉球喷洒乙醇消毒或擦拭消毒。
(四)火焰消毒
在开放式工作台上培养或其他无菌操作时，首先点燃酒精灯。之后的一切操作， 如安装吸管帽、打开或关闭瓶口等， 所有这些都需要在火焰附近燃烧消毒管口或瓶口后进行。金属器械不能在火焰中燃烧太久，吸收过培养液的吸管不能再用火焰燃烧， 防止吸管内残留的培养液烧焦，使有害物质在接下来使用时带入培养液。无菌操作台或超净工作台操作时，火焰消毒是不必要的， 甚至是有害的。
(五)实验操作
细胞培养时，动作应稳定准确，动作范围应尽可能小。在工作台上，实用物品要摆放合理， 右手用的东西放在右边，左手用的东西放在左边。中央放置酒精灯。打开试剂瓶，尽量倾斜。而打开培养瓶则应平放。工作要有序，尽量缩短各种液体和细胞的暴露时间。用不同的吸管吸收不同的液体，处理不同的细胞，以避免液体和细胞之间的交叉污染。
