细胞转染实验的不同方法

1.DEAE-葡聚糖。这种转染方法早在1965年就出现了。带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体可与带负电的DNA分子结合，使DNA复合物与带负电的细胞表面结合。DNA复合体通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克也可能是细胞吞咽进入细胞。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染，可重复性好，转染时应去除血清。

2.磷酸钙共沉淀转染。最早于1973年开始使用。氯化钙 DNA 磷酸缓冲液按一定比例混合，在细胞膜表面形成极小的磷酸钙-DNA复合物沉淀粘附，借助内吞进入细胞质。沉淀颗粒的大小和质量对转染的成功至关重要。pH值、钙离子浓度、DNA浓度、沉淀反应时间、细胞孵化时间甚至各组分的添加顺序和混合都可能对结果产生影响，重复性差。这种方法更容易获得稳定的转染，但很难转染原代细胞。

3. 电穿孔法。对细胞进行短暂的高电场电脉冲处理，沿细胞膜的电压差会导致细胞膜暂时穿孔。DNA被认为通过孔扩散到细胞中。电脉冲和场强的优化对于成功的感染非常重要，因为场强过高，电脉冲时间过长，会不可逆地损伤细胞膜，裂解细胞。理论上，电穿孔法可用于各种细胞，不需要购买特殊试剂，但需要昂贵的电转仪。由于细胞死亡率高，每次转染都需要更多的细胞和DNA。每个细胞电转的条件都需要多次优化。

4. 脂质体法。中性脂质体用脂质膜包裹DNA，用脂质膜将DNA引入细胞膜。带正电的阳离子脂质体是不同的。DNA没有提前埋在脂质体中，而是自动将负电的DNA与带正电的脂质体结合，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面通过内吞导入细胞。脂质体法始于1987年，其出现大大提高了转染效率、稳定性和可重复性。阳离子脂质体细胞毒性较高，可能会干扰不同细胞的代谢。

5. 病毒介导的感染。感染需要将目的基因克隆到特定的病毒系统中，然后在包装细胞包装后进行感染。其优点是感染效率特别高，特别是难以感染的原始细胞和活体细胞。缺点是病毒周期长，环节多，容易出错，成本高。

六、非脂质体转染 。最新的纳米聚合物转染试剂，如Entranster试剂、纳米材料、细胞毒性小、转染效率高，逐渐成为各大实验室的首选。