细胞生长时的表型会发生变化或漂变，因此必须计数细胞，计数后应立即冻结。
冷冻细胞前
- 检查冷冻细胞所需的试剂和器具是否准备好。
- 可用于冷冻的冷冻储管确认无菌 。
- 确认液氮罐中是否有冷冻细胞。
冷冻细胞
- 将培养基中的细胞培养到对数生长期。
- 活细胞计数，不要冻死细胞比例高达20％上述细胞。
- 要确定冻存量，需要多个冻存管来安排。
冻结细胞融化时稀释10 稀释后的液体是5X种子液。
例如，如果种子液密度为5.0 X 105 个／ ml, 当细胞融化后再次悬浮时，细胞的密度为2. 5 X 106 个／ ml, 因此，冻结细胞时的细胞密度为2.5 X 107 个／ ml 。
- 准备好冷冻培养基， 分装成1 ml, 冷冻培养基通常包括一般培养基、10%~20%血清、5%~10%％甘油或二甲基亚啶。如果不知道用什么，用20％的血清和10％二甲基亚啶。
- 用移液管在冷冻培养基中小心吹粒状沉淀。
- 每个冻存管分装1 ml 冷冻培养基，放在冰上操作。
- 将冷冻储存管放入冷冻储存箱中，标记，放入-60C 或将16~24放置在温度较低的冰箱中 小时。
- 将一些液氮倒入冰箱，将细胞从冰箱转移到液氮罐之间，然后将细胞放入这样的冰箱中。如果没有现成的液氮，可以将细胞放在干冰上。
- 将细胞放置在适当的位置，并立即做好记录。
液氮的使用
- 细胞通常储存在液氮罐或液氮制冷柜中，但液氮应每隔几周补充一次
- 液氮罐自动填充必须定期检查，以确保管道畅通，液氮罐不空。
- 操作液氮罐内容器时戴厚手套，否则会冻伤手臂。
- 从液氮罐中取出细胞时，至少要戴上乳胶手套
- 不要将物品悬挂在液氮罐中，也不要吸入气化液氮，用手挥动液氮，就能看到液体表面。
- 戴上保护眼睛的眼罩，以免冻存管在操作冻存管时溅到眼睛上。
- 不得将未拧紧的管道放入液氮中，并提前找负责液氮罐管理的人员确定位置，不得乱放。
- 不要关闭报警，定期检查。
- 如果您听到液氮罐的报警声，请立即通知实验室管理人员。如果是周末或凌晨，检查确认液氮表面是否过低或温度过高，然后联系负责液氮罐的人员。
