水溶性染料 alamarBlue 已用于体外定量多种类型细胞的活力( Fields and Lancaster 1993; Ahmed et al. 1994 ) 。该试剂极其稳定无毒，可用于细胞长期连续监测( Ahmed et al. 1994 ) 。基于上述原因， alamarblue法被认为优于MTT 经典的细胞活力检测方法，如检测。在比较实验中， 细胞分别处理117种不同的毒性分子， 对大多数化合物而言， alamarBlue 法比MTT 法略为灵敏( Hamid et al. 2004 ) 。
以下方案介绍了96的培养 孔组织培养板的细胞进行活力检测。为了适应更大的培养板，可以改变检测方法； 但对转染试剂和转染方案参数对细胞活力的影响进行初步分析， 96孔板的形式是最节约成本的。
试剂
alamarBlue
已转染的哺乳动物细胞
SDS (3% ，可选；见步骤5 )
设备
具有读板功能的荧光计
96 孔板， 标准平底
96 孔板， 经组织培训处理
方法
- 在96 每孔接种50个孔板 ~ 50 000 细胞。每组条件3 个重复。
制作未处理细胞和无细胞的对照孔。此外， 如需要， 可用作含有转染试剂但无细胞的孔和细胞毒性的阳性对照孔。
细胞活力检测通常在基因毒性刺激后进行。根据实验需要，毒性试剂可以在检测过程中保留在细胞培养基或在检测前去除。由于许多叶片天青还原反应发生在线粒体中，会干扰线粒体功能的毒性试剂可能会产生误导性结果。
- 测量孔内培养基的体积，并添加0.1 alamarblue，双体积 。
pH存在于细胞培养基中 酚红的指示剂不会干扰检测。
- 在37°C 组织培训孵箱培训1 ~ 4h 。
由于细胞系的代谢能力和染料的孵化时间长度不同，不同类型的细胞还原叶片的能力也不同。1.对于大多数应用程序 ~4h 孵化就够了。尽管5000~ 50 000 孵化lh的个细胞 可以，但是少了50 ~ 5000 可能需要24小时的细胞 长期孵育。对于筛选试验的优化，需要通过实验来确定每个孔细胞的数量和孵化时间长度。
4 . 将l00μL 细胞培养上清转移到平底96 孔板， 步骤5继续进行 或步骤6 。
5 . 如果不立即读数，每L00μL 加入50个初始培养体积μL 3% SDS 为了终止和稳定反应。例如，避光并覆盖培养板以防止蒸发， 可在室温下保存24h 继续下一步。
- 在560nm 590nm刺激波长 发射波长下读板。如果使用固定波长的读板仪，可用的刺激波长范围为540~570nm， 发射波长范围为580 ~ 610nm 。
如果读数超过荧光仪的检测限度，则使用细胞培养基或PBS 将悬液稀释10 ~ 100 倍， 然后重复测量。
alamarBlue 也可以用分光光度计测量570nm 吸光度为600 nm 读数作为参考。然而，荧光检测比吸光检测灵敏得多。
- 从每个读数中减去空白值（ 即无细胞孔) ，用校正值作图。读数与代谢活性和细胞活力成正比。
