化学词典告诉你薄层色谱法的标准操作程序和注意事项。薄层色谱法（TLC），将适当的固定相涂在玻璃板、塑料或铝基板上，形成均匀的薄层。点样展开后，根据比移值（Rf）根据同法获得的色谱图与适当对照物的比移值（Rf）用于药物鉴别、杂质检查或含量测定的方法进行比较。
薄层色谱法标准操作程序
一、仪器和材料
1、玻璃板：除另有规定外，使用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×规格为20cm，要求光滑、平整、洗净后不附水滴，干燥。
固定相或载体：硅胶G是最常用的、硅胶GF、硅胶H、硅藻土和硅藻土G254是硅胶HF254、氧化铝，氧化铝G、F254等微晶纤维素、微晶纤维素。其粒径一般为10-40µm。薄层涂层一般可分为无粘合剂和含粘合剂；前者将固定相直接涂在玻璃板上，后者在固定相中加入一定量的粘合剂。一般用10-15%煅烧石膏(CaSO4.2H2O140℃烘干4小时)，混合后加水，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5-0.7%)调整成糊状，均匀涂在玻璃板上。还有薄层含有一定的展开液或缓冲液。
2、涂层：固定相或载体应能在玻璃板上涂上一层均匀的薄层，以满足厚度要求。
3、点样器：常用支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。
4、展开室：应使用适合薄层板尺寸的玻璃薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，便于观察。
二、操作方法
1、薄层板制备:除另有规定外，将一个固定相和三个水在研碗中向一个方向研磨混合，去除表面气泡后，倒入涂布机中，将涂布机平稳移动在玻璃板上涂布(厚度为0.2-0.3mm），取下薄层玻璃板，将水平台在室温下晾干，然后在110℃下烘干30分钟。即在有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀性(可通过透射光和反射光检查)。
2、点样：除另有规定外，用点样器在薄层板上点样，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2-4mm，点间距约为1.5-2.0cm，点间距可视斑点扩散，不影响检测。点样时注意不要损坏薄层表面。
3、展开:如果展开室需要提前用展开剂饱和，可以在室内加入足够的展开剂，在墙上贴两个和房间一样高一样宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶盖，使系统平衡或按正文操作。将点样的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为0.5-1.0cm(不要将样品浸入展开剂中)、密封室盖等。展开到规定距离(一般为10-15cm)，取出薄层板，晾干，按各种项下的规定进行检测。如果需要用薄层扫描仪扫描检出色谱斑点，或者直接在薄层上扫描定量。可采用薄层扫描法。除另有规定外，薄层扫描方法还可根据各种薄层扫描仪的结构特点和说明选择吸收法或荧光法，并结合具体情况进行双波长或单波长扫描。除另有规定外，薄层扫描方法还可根据各种薄层扫描仪的结构特点和说明，结合具体情况选择吸收法或荧光法，采用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，在一定浓度范围内确保试验产品的斑点呈线性的情况下，应在同一薄层上对试验产品和控制产品进行比较和计算定量，以减少误差。只有获得分离度和再现性好的薄层色谱，才能获得令人满意的结果。
薄层色谱法操作注意事项
1、所用玻璃板应清洗干净，不要挂水滴，光滑光滑。
2、铺板应均匀，厚度合适，室温干燥后在110℃活化30分钟，放入有干燥剂的干燥箱或干燥器备用。
3、点样点一般是圆点，不能太大。
