化学词典告诉你亲和色谱的原理及相关影响因素。亲和色谱是什么？亲和色谱又称亲和层析，是一种利用固定相结合特性分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接具有一定组合能力的分子，其组合是可逆的，在改变流相条件时可以相互分离。亲和色谱可用于纯化或浓缩混合物中的某一分子，也可用于去处或降低混合物中某一分子的含量。
亲和色谱的原理
将一对可逆结合和解离生物分子的一方作为基础（也称为基体），与大孔径、亲水性固相载体连接，制成专用的亲和吸附剂，然后用这种亲和吸附剂填充色谱柱。当含有分离物质的混合物随流通过色谱柱时，亲和吸附剂上的基础有选择地吸附可与之结合的物质，而其他蛋白质和杂质不被吸附，从色谱柱中流出，使用适当的缓冲液对分离物质和基解进行吸附，以获得纯化的目的产物。
影响亲和色谱的因素
1、上样体积
如果目标产品与基础的结合较强，样品体积对亲和色谱的影响较小。如果两者之间的结合力较弱，样品浓度应较高，样品量不得超过色谱柱载荷的5%~10%。
2、柱长
亲和力柱的长度需要根据亲和力介质的性质来确定。如果亲和力介质载量高，与目标产品(目标物体)作用力强，可以选择较短的珠子(柱子)；相反，应增加柱的长度，以确保目标产品和亲和力介质有足够的作用时间。
3、流速
在亲和吸附过程中，需要一个缓慢的过程来实现目标产品和基础之间的结合反应平衡。因此，样品柱的流量应尽可能慢，以确保目标产品与基础之间有足够的时间结合，特别是当两者之间的结合力较弱，样品浓度过高时。
4、温度
温度效应在亲和色谱中更为重要，亲和介质的吸附能力受温度的影响，可以利用不同的温度进行吸附和洗脱。一般来说，亲和力介质的吸附能力随着温度的升高而降低，因此可以选择较低的温度，使待分离物质与基础具有较大的亲和力，充分结合；在洗涤时使用较高的温度，降低待分离物质与基础的亲和力，方便待分离物质从基础上脱落。例如，一般选择在4℃吸附，在25℃下解吸。
