化学词典告诉你亲和分析的原理和载体要求。亲和分析是一种分离生物大分子的分离方法,利用生物大分子与某些相应的特定分子的特异识别和可逆结合。亲和分析是一种分离蛋白质的有效方法,通常只需要一步处理就能获得高纯度的蛋白质。

亲和分析的原理
亲和层分析是一种吸附层分析,抗原(或抗体)与相应的抗体(或抗原)特异性结合,在一定条件下是可逆的。因此,抗原(或抗体)固相后,液相中的相应抗体(或抗原)可以选择性地与液相中的其他蛋白质分离,从而达到分离和纯化的目的。
亲和层析的载体要求
理想载体应具备以下基本条件:①不溶于水,但高度亲水;②非特异性吸附少的惰性物质;③可激活相当量的化学基团;④稳定的理化性质;⑤机械性能好,有一定的颗粒形式来保持一定的流速;⑥透气性好,最好是多孔网状结构,使大分子能够自由通过;⑦能抵抗微生物和醇的作用。
肥皂土、玻璃球、石英球、羟磷酸钙、氧化铝、聚丙烯酰胺凝胶、淀粉凝胶、葡聚糖凝胶、纤维素和琼脂糖可作为固相载体。在这些载体中,肥皂土和玻璃球的吸附能力较弱,不能防止非特异性吸附。纤维素的非特异性吸附能力很强。聚丙烯酰胺凝胶是一种很好的载体。
琼脂糖凝胶具有亲水性强、理化性稳定、不受细菌和酶影响、网状结构疏松等优点。当缓冲液离子浓度大于0.05mol/L时,对蛋白质几乎没有非特异性吸附。溴化氢容易激活琼脂糖凝胶,激活后性质稳定,能承受0.1等各种层析条件Mol/L NaoH或1mol//L HCL处理2h~3h,蛋白质变性剂7mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理,不引起性质变化,易于再生和重复使用。
琼脂糖凝胶微球的产品名为Sepharose,含糖浓度为2%、4%、6%时分别称为2B、4B、6B。因为Sepharose 4B的结构比6B松散,吸附容量比2B大,所以4B应用最广泛。

