化学词典告诉你色谱柱的清洁溶剂和使用注意事项。色谱柱是指用固定相用于分离混合物的柱管。色谱柱的正确使用和维护非常重要，稍有不慎就会降低柱效，缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，应注意以下问题，以维护色谱柱。
清洗色谱柱的溶剂
硅胶柱为正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后按相反的顺序冲洗，所有溶剂必须严格脱水。甲醇可以清除残留的强极性杂质，并再次激活硅胶表面。反相柱用水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次冲洗，然后按相反顺序依次冲洗。如果下一步分析中使用的流动相不含缓冲液，则可以省略最后一步用水冲洗。一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质，在甲醇(乙腈)冲洗时重复注射100~200µl四氢呋喃几次有助于去除强疏水杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液可以去除类脂。有时还会注射几次二甲亚啶。此外，用乙腈、丙酮和三氟乙酸(0.1%)梯度洗脱可以去除蛋白质污染。
阳离子交换柱可用稀酸缓冲液冲洗，阴离子交换柱可用稀碱缓冲液冲洗，去除交换性强的盐，然后用水、甲醇、二氯甲烷（去除固定相表面吸附的有机物）、依次冲洗甲醇和水。
⑦保存色谱柱时，柱内应充满乙腈或甲醇，柱接头应拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内过夜或更长时间。
⑧在色谱柱的使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片堵塞，应更换滤片或取出清洗；另一种可能是大分子进入柱，污染柱头；如果柱效应降低或色谱峰变形，柱头可能坍塌，死亡体积增加。
在后两种情况下，小心拧开柱接头，取出1~2mm高度的柱头填料（注意清洁污染填料），然后平整柱内填料。然后用适当溶剂湿润的固定相填充色谱柱，压平，然后拧紧柱接头。这提高了柱的效率，但很难恢复到新柱的水平。
柱故障通常是柱端部分。在分析柱前安装与分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以保护和延长柱的使用寿命。使用保护柱会失去一定的柱效应，这是值得的。
色谱柱的使用寿命通常在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料只能在pH2~9范围内使用。柱使用一段时间后，柱顶可能会保留一些吸附性强的物质，特别是一些有色物质更容易看到被吸入柱顶的填料。新色谱柱使用一段时间后，柱顶填料可能会坍塌，降低柱效应。此时，还可以添加填料来恢复柱效应。
每次工作结束后，最好用洗脱液冲洗。例如，ODS柱应用甲醇冲洗至基线平衡。当使用盐缓冲溶液作为流相时，使用后应使用无盐流相冲洗。含卤素元素（氟、氯、溴）的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不应长期接触。如果不经常使用安装在HPLC仪器上的柱子，应每4~5天开始冲洗15分钟。
使用色谱柱的注意事项
①避免压力和温度的急剧变化以及任何机械振动。温度的突然变化或色谱柱从高处脱落会影响柱内的填充状态；柱压的突然升高或降低也会影响冲动柱内的填料。因此，在调整流速时应缓慢进行，阀门进样时不应旋转过慢（如上所述）。
②溶剂的组成应逐渐改变，特别是在反相色谱中，不应直接从有机溶剂改为全水，反之亦然。
③一般来说，色谱柱不能反冲。只有当生产者指出柱可以反冲时，才能反冲去除柱头留下的杂质。否则，反冲会迅速降低柱效。
④选择使用合适的流动相（特别是pH），以避免损坏固定相。有时，预柱可以连接到进样器前面。当分析柱与硅胶结合时，预柱为硅胶，可以使流动相在进入分析柱之前被硅胶“饱和”，以避免分析柱中的硅胶基质溶解。
⑤避免将复杂的基质样品，特别是生物样品直接注入柱中，需要预处理样品或在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱通常是填充类似固定相的短柱。保护柱是可以的，应该经常更换。
⑥色谱柱经常用强溶剂清洗，以去除柱中保留的杂质。清洗时，流路系统中流相的置换应逐渐过渡为混溶溶剂，每个流相的体积应约为柱体积的20倍，即常规分析需要50~75ml。
