瑞达恒辉 瑞达恒辉 小鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)elisa试剂盒;48T/盒

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    品牌名称 : 瑞达恒辉 商品型号 : RD-RX20350-48T
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    商品名称: 瑞达恒辉 小鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)elisa试剂盒;48T/盒
    品牌: 瑞达恒辉
    型号: RD-RX20350-48T

    ELISA试剂盒,定量使用,只用于科研实验,不得用于医药等其它用途。

    样本处理及要求

    1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
    3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
    4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

    注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

    注意事项
    1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
    2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
    3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
    4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
    5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
    6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
    7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
    8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
    9. 不能使用过期产品。
    10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

    试剂准备
    试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
    20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

    操作步骤
    1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
    2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
    3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
    4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
    5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
    6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

    实验结果计算
    以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。