葡萄糖-6磷酸脱氢酶抗体的应用

2021年06月04日 阅读量:2
背景[1-3]

葡萄糖-6磷酸脱氢酶抗体是一类可以特异性结合葡萄糖-6磷酸脱氢酶的多克隆抗体,主要用于体外检测葡萄糖-6磷酸脱氢酶的相关实验。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶glucose 6-phosphatedehydrogenase是糖酵解途径、柠檬酸循环以外的另一个葡萄糖分解途径的磷酸葡萄糖酸途径(磷酸戊糖途径)中的第一个酶EC1.1.1.49。

很早就称为6-磷酸葡糖脱氢酶(zwischenferment),它催化6-磷酸葡萄糖脱氢,形成6-磷酸葡糖酸。以NADP为电子受体。整个反应的平衡是趋向于NADPH的生成,后者用于脂肪酸等的还原性生物合成反应。本酶存在于细胞的可溶性部分。

葡萄糖-6磷酸脱氢酶

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶主要参与磷酸戊糖途径,也能缓慢地作用在β-D-葡萄糖等其他糖类上。这种酶可由其底物葡萄糖-6-磷酸激活,如果人类表达葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的基因G6PD有缺陷,将会导致葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症,引发非免疫性溶血性贫血。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶存在于众多生物细胞内,高等植物拥有数种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的蛋白异构体(protein isoform),它们分布于细胞质基质、和过氧化物酶体等细胞结构中。

应用[4][5] 用于海胆(Ps日本东曹消光剂价格ammechinus miliaris L.)受精卵中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶定位及定量方法的建立和应用

以模式生物海胆为试验材料,利用低温冷冻半薄切片技术,研究比较了免疫金银染色和免疫荧光两种方法,试验归纳了它们各自的特点及适用性;

并利用这两种技术方法对海胆卵细胞受精过程中关键酶蛋白——葡萄糖-6-磷酸脱氢酶进行了定位及定量研究;

此外,利用in vivo图像分析技术和“灰度-吸光度”技术,以葡萄糖-6-磷酸脱氢酶为目标蛋白,探讨了实时测定活体卵细胞受精过程中酶蛋白活性变化的可行性,并分析了葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在受精过程中的活性变化。

(1)利用基于低温冷冻半薄切片的免疫金银染色技术,标记具有较高持久性,此方法尤其适用于酶蛋白的定量分析以及在与其他组织化学手段相结合的条件下进行的活性研究;而免疫荧光技术,清晰的活性标记可以很容易的被观测到,是研究酶蛋白定位的合适手段。

(2)基于这两种技术的比较分析,随后试验采用免疫荧光技术对海胆卵细胞受精过程中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶进行了定位分析。研究发现,在未受精的卵细胞中,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶主要堆积于皮层颗粒内或附着于内质网膜上。经过受精刺激之后,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶被从内质网和皮层颗粒中释放出来。同时,采用免疫金银染色方法定量分析了海胆卵细胞受精过程中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶酶蛋白量的变化。测量结果显示为逐渐下降趋势,单因素方差和同类子集分析表明,未受精卵细胞内G6PDH含量和受精后卵细胞内G6PDH含量存在显著差异(p<0.05)。

(3)利用in vivo图像分析技术对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在受精过程中的活性进行了研究。试验在方法上通过生物化学、物理光学、影像学的有机结合,实现了在不破坏细胞的前提下,对存活海胆卵细胞的受精过程中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性进行了实时监测和定量分析。

参考文献

[1]Calcium and fertilization:the beginning of life[J].亨斯迈金属络合染料Luigia Santella,Dmitri Lim,Francesco Moccia.Trends in Biochemical Sciences.2004(8)

[2]Activation of multidrug efflux transporter activity at fertilization in sea urchin embryos(Strongylocentrotus purpuratus)[J].Amro M.Hamdoun,Gary N.Cherr,Troy A.Roepke,David Epel.Developmental Biology.2004(2)

[3]Egg Activation at Fertilization:Where It All Begins[J].Linda L.Runft,Laurinda A.Jaffe,Lisa M.Mehlmann.Developmental Biology.2002(2)

[4]Glucose-6-phosphate dehydrogenase:the key to sex-related xenobiotic toxicity in hepatocytes of European flounder(Platichthys flesus L.)[J].Aquatic Toxicology.2002(4)

[5]王婷婷.海胆(Psammechinus miliaris L.)受精卵中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶定位及定量方法的建立和应用[D].中国海洋大学,2009.

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